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1、合成DNA溶液在室溫下放置了數(shù)天，還可以使用嗎？

常溫下溶液中的Oligo DNA可以放置3～4天，但最好不要放置一周以上。其降解速度會受溶液中的菌體、核酸酶等的影響。

2、怎樣理解測定的OD值？

進行OD值測定時，分光光度計上顯示的數(shù)值為每毫升溶液中的OD值。當測定200ul溶液中的OD值為1.5時，溶液整體的OD量應(yīng)該為多少？此時的OD值 = 1.5 OD/ml × 0.2 ml = 0.3 OD。

3、合成Oligo DNA應(yīng)怎樣保存？

保存合成的Oligo DNA應(yīng)該注意以下幾點： 

（1）干燥制品很穩(wěn)定，長期保存請放置于-20℃。

（2）溶解后的溶液DNA短期內(nèi)（1～2周）使用可放置在4℃下保存，長期保存請放置于-20℃。溶解DNA時，請注意使用無菌、無核酸酶的水或TE Buffer。

（3）熒光標記引物請避光在4℃保存，長期保存請避光放置于-20℃。

4、制品溶解后發(fā)現(xiàn)有少許沉淀，會影響實驗結(jié)果嗎？

所有的制品純化后都要進行脫鹽，脫鹽是使用C18柱進行的，偶爾會有微量的樹脂溢出而進入制品。樹脂不影響任何反應(yīng)結(jié)果，請稍許離心后取上清使用。

5、PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后測序發(fā)現(xiàn)，引物處的堿基有錯誤，為什么？

（1） 合成機管路的瞬時阻堵，造成化學(xué)反應(yīng)的瞬間中斷，其結(jié)果可能會發(fā)生單個（或部分）堿基的缺失。

（2） 計算機程序失靈，導(dǎo)致錯誤合成。

（3） 合成過程中，堿基附加至DNA片段之前，堿基和堿基之間發(fā)生了偶聯(lián)，然后再附加到了DNA片段上，造成多堿基現(xiàn)象。

（4） 合成時堿基G可能會轉(zhuǎn)化成烯醇異構(gòu)體，此時進行PCR反應(yīng)時G會轉(zhuǎn)變成A。

（5） 合成過程中的脫嘌呤作用，對脫嘌呤后的堿基DNA聚合酶不能識別，此時可能觀察到A或G的缺失。嘌呤含量越高，就越容易發(fā)生這種情況。

（6） 不完全的脫保護結(jié)果。通常C脫得快，G脫得慢。不完全脫保護會發(fā)生堿基缺失。

（7） 合成過程中的Capping（蓋帽）反應(yīng)不完全，使短片段DNA繼續(xù)參與合成，造成堿基缺失。

上述這些情況發(fā)生的可能性都極低。然而，合成的DNA鏈越長，發(fā)生這種情況的概率也就越大。

6、怎樣才能保證Oligo DNA的正確性？

（1） 合成Oligo DNA時，選用高純度級制品。

（2）避免使用大于50nt的長鏈Oligo DNA，最好選用小于35nt的合成DNA制品。

（3） 進行克隆實驗時，每次克隆都須進行測序驗證，以保證序列的正確性，然后再進行進一步實驗。進行蛋白表達實驗時，尤其需要注意。

7、Oligo DNA最長可以合成多少個堿基？

以每步反應(yīng)效率為99%進行計算，粗略計算合成到100個堿基時，目的DNA片段的比例便為0 （精確數(shù)為37.0%），要想保證合成DNA的堿基100%正確，Oligo DNA的長度最好不要超過70nt，當長度達80nt以上時，要想保證一個堿基不錯就很困難了，因此合成越長的片段合成費用越高。

8、一般的合成Oligo DNA的5'和3'末端有Q嗎？（Q為修飾）

沒有，5'和3'末端均為-OH基。如需要加Q，訂貨時請?zhí)貏e注明，此時需收取加Q （Q修飾）的費用。